- Od próbki do sekwencji
Mapa całego łańcucha pomiarowego: endpoint, pobranie, ekstrakcja, biblioteka, pula, instrument, FASTQ/BAM/VCF, callable region, potwierdzenie, dane, decyzje rescue/rebuild i dobór skali nanopore.
- Biblioteka sekwencyjna: fragmentacja, adaptery, indeksy i amplifikacja
Jak próbka staje się zbiorem cząsteczek gotowych do odczytu: fragmentacja, końce, ligacja, adaptery, indeksy, UMI, PCR, selekcja rozmiaru, pooling i kontrola złożoności.
- Sanger, krótkie i długie odczyty
Projekt wyboru technologii od klasy wariantu, materiału, mapowalności, molekularnego pokrycia i fazy po Sanger, krótkie reads, HiFi, nanopore, projekt hybrydowy oraz ortogonalne potwierdzenie.
- Sekwenatory: architektura instrumentu, materiały zużywalne, run i jakość
Sekwenator jako pełny układ pomiarowy: consumable, fluidyka, sensor, primary analysis, kontrola runu i próbki, utrzymanie, informatyka oraz trzy klasy aparatury nanoporowej.
- Platformy krótkich odczytów: co naprawdę mierzy sekwenator
Od klastra, nanoballa albo studzienki przez cykle chemii i pomiar światła, wiązania lub pH do korekty sygnału, basecallu, Q-score, FASTQ i kryteriów jakości runu.
- Sekwencjonowanie nanoporowe
Od natywnej cząsteczki, pora, motoru i prądu jonowego przez bibliotekę, basecalling, kontrolę runu i fazowanie po warianty strukturalne, modyfikacje, direct RNA, adaptive sampling oraz walidację wyniku.
- Pokrycie, mapowalność, duplikaty i bias referencji
Od raw depth przez niezależne molekuły, duplikaty, GC i mapowanie do callable region: jak ocenić oba allele, paralogi, reference bias, dropout, mozaikę i granice wyniku ujemnego.
- Variant calling: od FASTQ do listy kandydatów
Od tożsamości próbki, referencji, alignment i przygotowania BAM/CRAM przez local assembly oraz modele genotypu do filtrowanego VCF dla germline, somatic, CNV, SV i trudnych wariantów.
- Od surowego wariantu do wyniku potwierdzonego
Jak dobrać niezależny dowód do źródła błędu: od tożsamości i nowej ekstrakcji przez Sanger, UMI, qPCR, ddPCR, MLPA i FISH po long reads, fazę, RNA i walidację funkcjonalną.
- Składanie i adnotacja genomu
Pełny projekt rekonstrukcji genomu: dane wejściowe, graf, kontigi, fazowanie, scaffolding, polishing, kontrola zanieczyszczeń i jakości oraz adnotacja powtórzeń, genów i funkcji.
- Transkryptomika single-cell i spatial
Od dawcy, dysocjacji, barcode i UMI przez macierz, QC, pseudoreplikację, integrację oraz pseudoczas do spatial, dekonwolucji, segmentacji i walidacji organoidów oraz produktów komórkowych.
- Jak czyta się epigenom
Od składu próbki i kontroli przez metylację, ATAC, ChIP/CUT&Tag, Hi-C i single-cell po fazę alleli, integrację warstw, test przyczynowości oraz ocenę przeprogramowania.
Odczyt genomu
Mapa od próbki i biblioteki przez wybór platformy, instrument i fizyczny pomiar po pokrycie, variant calling, potwierdzenie, składanie genomu oraz pomiary transkryptomu i epigenomu.